耦合末端盐桥与定点突变的重组腈水合酶催化动力学

• 作者: 于慧敏 沈忠耀 罗晖 贾旭 陈杰
• 来源期刊: 化工学报
• 关键词: 腈水合酶 末端盐桥 定点突变 反应动力学 米氏方程 失活动力学
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 生物化学工程与技术
• 页码范围: 2821-2828
• 页数: 8页
• 分类号: Q814.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0438-1157.2014.07.044

摘要

双亚基腈水合酶是催化丙烯腈水合生产丙烯酰胺的重要工业酶。通过Discovery Studio 2.5软件对C-末端盐桥耦合定点突变改造的耐热型基因重组腈水合酶NHaseM-TH-SBM（S344K-S346K-L347E-N362S-435DT436(+)）进行盐桥网络分析，发现其全局盐桥总数有所下降，但双亚基界面间盐桥数量提高到7个。在重组大肠杆菌中表达了原腈水合酶NHaseM-TH（TH）、盐桥突变酶NHaseM-TH-SB（SB）和盐桥耦合定点突变的重组酶NHaseM-TH-SBM （SBM），研究了3种酶的催化反应动力学和失活动力学。结果表明，SBM的腈水合酶活性为543.9 U·mg-1，比TH提高了31.0%；其米氏方程催化速率常数Kcat比TH提高了20%。SBM的表观失活常数KD在25～42℃范围内均明显低于对照TH，在42℃时为TH的68.0%，显示了良好的热稳定性。SBM是活性和稳定性同时提高的重组腈水合酶。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈杰	清华大学化学工程系生物化工研究所	23	460	12.0	21.0
2	罗晖	北京科技大学生物科学与技术系	32	368	9.0	18.0
3	于慧敏	清华大学化学工程系生物化工研究所	38	305	11.0	15.0
4	沈忠耀	清华大学化学工程系生物化工研究所	71	1232	20.0	32.0
5	贾旭	北京科技大学生物科学与技术系	1	2	1.0	1.0