西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物的制备及鉴定

• 作者: 刘云龙 周洁 王光文 聂振
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 西妥昔单抗 β-葡萄糖苷酶 偶联物 膀胱肿瘤 癌 Sulfo-SMCC
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 1153-1155
• 页数: 3页
• 分类号: R737.1|R73-36
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2014.12.001

摘要

目的：制备西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物并鉴定其酶活性与抗体活性。方法采用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(Sulfo-SMCC)将西妥昔单抗、β-葡萄糖苷酶进行共价交联。采用非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、比色法、间接免疫荧光法对偶联物进行鉴定并检测β-葡萄糖苷酶、西妥昔单抗的活性。结果在电泳图上可分别见到β葡萄糖苷酶、西妥昔单抗、西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物的清晰条带。比色法测定结果显示，西妥昔单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物的酶活性低于β-葡萄糖苷酶(U/L：672.97±46.19 vs 869.50±57.28，t=5.972，P<0.05)，但仍保持良好的酶活性。在荧光显微镜下可见到与偶联物共同作用的人膀胱癌EJ细胞带有红色荧光。结论 Sulfo-SMCC可成功将西妥昔单抗、β-葡萄糖苷酶偶联，且偶联物仍能保持良好的酶活性与抗体活性。