滇龙胆GrGPPS基因的克隆及其序列分析与原核表达

• 作者: 张晓东 李富生 李彩霞 李涛 王元忠 王彩云
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 滇龙胆 牻牛儿基焦磷酸合成酶基因 基因克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（14）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2060-2068
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.14.020

摘要

目的 从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆单萜化合物合成的关键酶牻牛儿基焦磷酸合成酶基因GrGPPS,进行序列特征分析和原核表达.方法 根据三年生滇龙胆转录组GrGPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到GrGPPS cDNA序列,并进行TA克隆、测序及序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrGPPS,转入Escherichia coli Rosetta(DE3)中,在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下进行表达.结果 GrGPPS cDNA全长1 107 bp,编码369个氨基酸;序列分析表明,GrGPPS基因是异戊烯基合成酶家族的成员;氨基酸序列系统发育分析表明,GrGPPS与金鱼草AmGPPS亲缘关系最近;构建pGEX-4T-1-GrGPPS重组质粒,获得稳定的pGEX-4T-1-GrGPPS原核表达体系.SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致.结论 克隆了GrGPPS基因,建立pGEX-4T-1-GrGPPS稳定的原核表达体系,为进一步纯化和鉴定GPPS蛋白并研究其结构和功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王元忠	云南省农业科学院药用植物研究所	162	905	14.0	19.0
2	李涛	玉溪师范学院资源与环境学院	70	340	10.0	12.0
3	李富生	云南农业大学农学与生物技术学院	84	686	15.0	23.0
4	王彩云	云南农业大学农学与生物技术学院	5	28	3.0	5.0
5	张晓东	玉溪师范学院资源与环境学院	31	71	5.0	7.0
6	李彩霞	玉溪师范学院资源与环境学院	19	43	4.0	6.0