钠钙交换体启动子促进诱导多能干细胞向心肌细胞转化

• 作者: Wang Yi-gang 何建新 余细勇 刘泽 向定成 戴波 李洪涛 肖定璋 邱健 陈斌
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 诱导 小鼠诱导多能干细胞 钠钙交换体启动子 慢病毒 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2014,（19）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 3069-3074
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6497字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344

摘要

背景：诱导多能干细胞治疗缺血性心脏病被认为是极具前景的方法，但目前仍未找到一种理想的诱导方式。目的：探讨钠钙交换体(NCX1)启动子诱导多能干细胞体外分化为心肌细胞的作用。<br>　　方法：构建含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒质粒，使用ViraPowerTM慢病毒包装系统共转染293FT细胞。收集病毒测定病毒滴度后感染小鼠诱导多能干细胞，并使用嘌呤霉素进行筛选。观察胚状体数量以及诱导多能干细胞的分化效率，使用RT-PCR、免疫荧光分析法检测心肌特异标记物。<br>　　结果与结论：成功构建了含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒，感染小鼠诱导多能干细胞后使用流式细胞仪分选NCX1+/GFP+细胞。与NCX1-/GFP-细胞相比，NCX1+/GFP+细胞在4 d即出现细胞分化和跳动，NCX1+细胞GATA4/MEF2c/Nkx2.5基因表达分别是NCX1-细胞的4.2，7.5，2.5倍，免疫荧光显示CX43和心肌肌钙蛋白I呈阳性表达。结果表明，钠钙交换体1启动子可以促进小鼠诱导多能干细胞向心肌细胞分化。