奶牛乳腺上皮细胞的不同培养方法比较及激素和细胞因子对β-酪蛋白mRNA表达的诱导

• 作者: 南雪梅 卜登攀 李文清 王加启
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 原代细胞培养 乳腺上皮细胞 激素 β-酪蛋白mRNA
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 反刍与草食动物营养
• 页码范围: 2607-2614
• 页数: 8页
• 分类号: S823
• 字数: 4888字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2014.09.021

摘要

本试验旨在建立一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,并研究不同激素和细胞因子对其表达β-酪蛋白mRNA的诱导作用.分别采用组织块培养法和机械破碎法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用成纤维细胞和乳腺上皮细胞对胰酶的敏感性不同,对获得的细胞进行纯化.通过细胞计数法测定纯化细胞的生长曲线,通过免疫荧光组织化学染色法检测角蛋白18的表达,通过实时定量PCR法检测8种不同激素和细胞因子组合培养液诱导细胞表达β-酪蛋白mRNA的效果.结果表明:通过机械破碎法可以分离得到增殖旺盛的奶牛乳腺上皮细胞,与组织块培养法相比,具有细胞迁出速度快等优点.细胞生长曲线呈典型的“S”型.在纯化的乳腺上皮细胞及第20代乳腺上皮细胞中都检测到角蛋白18的表达.100 ng/mL类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)显著提高了乳腺上皮细胞中β-酪蛋白mRNA的表达(P＜0.05).由结果可知,本试验采用的机械破碎法是一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,100 ng/mL IGF-Ⅰ对细胞中β-酪蛋白mRNA表达的诱导效果最好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王加启	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室	304	3565	32.0	47.0
2	李文清	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室	19	77	5.0	8.0