柑橘木虱黄龙病菌携带量与其内生菌群相关性

• 作者: 吴晓芳 孙丽琴 殷幼平 王中康 王芳
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 柑橘木虱 黄龙病菌 内生细菌 分离培养 PCR-DGGE
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 2151-2161
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.11.009

摘要

【目的】分析柑橘木虱（Diaphorinacitri）体内可能与黄龙病菌（CandidatusLiberibacter asiaticus）互作的内生细菌，为黄龙病菌的人工培养及其病害防控奠定基础。【方法】首先通过传统分离培养方法比较不同地理来源带黄龙病菌（带菌）和不带菌黄龙病菌（不带菌）的木虱中可培养内生细菌的差异。其次将带菌状况不同的木虱分别分为头、胸、腹3部分，经PCR扩增其16S rDNA的V6-V8区，用变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）方法，比较带菌状况不同的木虱内生细菌的差异和木虱不同部位内生细菌的差异。选择3种差异的内生细菌：Bacillus sp.、Salmonella sp.、Enterobacter sp.，在8份带菌状况不同的木虱样品中通过q-PCR分别对其进行实时荧光定量分析，再以总细菌量为校正计算包括黄龙病菌在内的4种细菌的相对含量，数据经LSD检验，以各种细菌相对含量的-lg值作图，先比较同一样品中3种细菌分别与黄龙病菌的相对含量关系，再比较同种细菌在不同样品中的特性，分析3种内生细菌和黄龙病菌的互作关系。【结果】不带菌木虱中可培养内生菌菌落丰富度和菌落形成单位均大于带菌木虱中。在不带菌木虱中共获得14株形态不同的菌株，分属于芽孢杆菌属（Bacillus，3株）、欧文氏菌属（Erwinia，1株）、克雷伯氏杆菌属（Klebsiella，1株）、葡萄球菌属（Staphylococcus，2株）、节杆菌属（Arthrobacter，1株）、泛菌属（Pantoea，2株）、果胶杆菌属（Pectobacterium，1株）、沙门氏菌属等（Salmonella，1株）、链霉菌属（Streptomyces，1株）、Massilia brevitalea（1株）等10个细菌属。在带菌木虱中分得的4株细菌在不带菌木虱中均分离到，分属于克雷伯氏菌属、芽孢杆菌属、果胶杆菌属。其中Dc-11（嗜气芽孢杆菌属）在带菌木虱和不带菌木虱中分离频率均达到100%，表明其为木虱体内常驻细菌；对木虱不同部位（头、胸、腹）内生细菌16S rDNA的PCR-DGGE图谱显示，带菌与不带菌木虱中细菌种群差别明显，带菌状况相同的木虱不同部位之间差别不明显。其中优势条带10（Wolbachiasp.）、12（Wolbachiapipientis）、13（Syncytiumendosymbiont of Diaphorina citri）、14（Uncultured bacterium）、19（Serratia marcescens）、21和22（均为嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonasmaltophilia）在木虱体内稳定存在，带菌木虱腹部特有优势内生细菌为Enterobacter sp.，木虱中同样也存在次级内生菌Wolbachia。q-PCR的结果验证了所选的3种细菌在前期传统分离培养和16S rDNA-PCR-DGGE中结果的可靠性，同时表明肠杆菌属在8份样品中与黄龙病菌呈正相关关系。【结论】黄龙病菌进入木虱体内会改变木虱内生细菌菌群种类和结构；嗜气芽孢杆菌（B. aerophilus）在柑橘木虱体内稳定存在，为木虱体内常驻菌群；Enterobacter sp.与黄龙病菌带菌量呈正相关，推测其可能与黄龙病菌互作。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王中康	重庆大学生命科学学院	57	766	16.0	25.0
2	殷幼平	重庆大学生命科学学院	57	718	14.0	23.0
3	王芳	重庆大学生命科学学院	19	172	6.0	13.0
4	孙丽琴	重庆大学生命科学学院	2	17	2.0	2.0
5	吴晓芳	重庆大学生命科学学院	2	17	2.0	2.0