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难转染悬浮细胞 OCI -LY8慢病毒过表达稳定细胞株的构建
难转染悬浮细胞 OCI -LY8慢病毒过表达稳定细胞株的构建
作者:
刘艳辉
张科平
徐方平
罗国兰
葛岩
许洁
陈洁
黄会杰
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
Fbw7
慢病毒载体
悬浮细胞
人淋巴瘤细胞
感染
荧光效率
摘要:
目的:探讨难转染悬浮细胞慢病毒过表达稳定细胞株的构建方法。方法选用人弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞株OCI-LY8为研究对象,分别用Fbw7基因的慢病毒原液、慢病毒浓缩液、慢病毒浓缩液加入终浓度为5μg/mL的1,5-二甲基-1,5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物(polybrene)、慢病毒浓缩液加入终浓度为10μg/mL的polybrene 4种方式进行感染。因慢病毒载体含有绿色荧光蛋白报告基因,故通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光的数量及强度来评判上述4种方式的感染效率,并用Real-time PCR和Western blot进行验证。结果慢病毒原液的感染效率极低,仅在少许细胞中看到极微弱的荧光;慢病毒浓缩液的感染效率尚可,约有60%的细胞可以观察到微弱的荧光;慢病毒浓缩液中加入5μg/mL polybrene的感染效率较高,约90%的细胞可以观察到较强的荧光;慢病毒浓缩液中加入10μg/mL polybrene的感染效率极高,几乎全部细胞均可以观察到很强的荧光。结论慢病毒浓缩液中加入合适浓度的polybrene是感染DLBCL细胞株OCI-LY8较为有效的方法。慢病毒的感染效率与细胞的状态、感染复数、polybrene的浓度密切相关。
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篇名
难转染悬浮细胞 OCI -LY8慢病毒过表达稳定细胞株的构建
来源期刊
广东医学
学科
关键词
Fbw7
慢病毒载体
悬浮细胞
人淋巴瘤细胞
感染
荧光效率
年,卷(期)
2014,(9)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
1323-1325,1326
页数
4页
分类号
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3393字
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Fbw7
慢病毒载体
悬浮细胞
人淋巴瘤细胞
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研究来源
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研究去脉
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期刊影响力
广东医学
主办单位:
广东省医学学术交流中心(广东省医学情报研究所)
出版周期:
半月刊
ISSN:
1001-9448
CN:
44-1192/R
开本:
大16开
出版地:
广州市越秀区惠福西路进步里2号之6
邮发代号:
46-66
创刊时间:
1963
语种:
chi
出版文献量(篇)
26055
总下载数(次)
22
总被引数(次)
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