H5亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒系统的表达及活性鉴定

• 作者: 侯继波 刘振兴 唐应华 李培英 查国飞 田震 陆吉虎 陈辉
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 HA蛋白 杆状病毒 活性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 15-19
• 页数: 5页
• 分类号: S852.6
• 字数: 4097字
• 语种: 中文

摘要

通过PCR方法从人工合成的质粒(232HAc-T)扩增获得全长的HA基因和缺失信号肽及跨膜区的HA基因.将此HA基因克隆至杆状病毒表达系统,构建重组穿梭载体rBac-232HAc和rBac-232HAδST,转染Sf9细胞后获得重组的杆状病毒rAc-232HAc和rAc-232HAδST.重组病毒在Sf9细胞中表达2种重组蛋白232HAc和232HAδST.2种蛋白在SDS-PAGE和Western blot检测中均获得预期目的条带,间接免疫荧光(IFA)检测呈阳性.血凝试验结果显示,232HAc蛋白能够使红细胞凝集,血凝(HA)效价为81og2;而232HAδST的HA效价低于21og2.血凝抑制试验结果表明,232HAc蛋白与H5阳性血清反应良好,效价类似于H5检测抗原对照,但不与其他病毒血清反应.结果提示:2种重组蛋白均能在Sf9细胞中表达,但重组232HAc蛋白能具有较好的血凝性,并能被H5阳性血清特异性抑制.本研究为研发H5亚型禽流感HA蛋白亚单位疫苗提供了生物材料.