人参β-actin基因实时荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 侯双利 刘翠晶 杨利民 韩梅
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 人参 内参基因 基因克隆 实时荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ
• 年，卷（期）: 2014,（17）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2530-2533
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.17.020

摘要

目的 建立人参β-actin基因实时荧光定量PCR的方法.方法 根据GenBank上其他高等植物β-actin基因保守区域设计一对特异性引物,将从人参中PCR扩增得到的β-actin基因克隆到pMD20-T载体上构建重组质粒,经1/10梯度稀释后用于制定标准曲线,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验. 结果 该方法检测β-actin基因的最低拷贝数为43拷贝/μL,在较广的范围内(43～4.3×107拷贝/μL)有良好的线性关系(R2=0.995 3);熔解曲线分析显示扩增产物为特异性单峰,其Tm值为(84.51±0.01)℃;5个不同浓度对照品组内试验变异系数为0.58％～2.79％,组间试验变异系数为2.61％～4.41％.结论 该方法具有快速、灵敏、特异、高通量及重复性强等优点,为β-actin基因作为内参基因进行人参功能基因表达的定量分析提供了方法学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨利民	吉林农业大学中药材学院	154	1937	21.0	37.0
2	韩梅	吉林农业大学中药材学院	120	1509	18.0	34.0
3	刘翠晶	吉林农业大学中药材学院	19	146	7.0	11.0
4	侯双利	吉林农业大学中药材学院	3	27	3.0	3.0