人胎盘微血管内皮细胞的分离培养及鉴定

• 作者: 何玉甜 周燕媚 孙斌 孙雯 张慧丽 张镜 方元龙 杜培丽 肖雪 陈敦金
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织工程 血管内皮细胞 人胎盘微血管内皮细胞 早期绒毛组织 原代培养 免疫细胞荧光化学 细胞鉴定 胰酶消化 纯化 FⅧ因子相关抗原 CD31 MTT法 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 研究与报告 -- 血管组织构建
• 页码范围: 1706-1711
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6810字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.11.011

摘要

背景：建立高纯度的人胎盘微血管内皮细胞体外培养体系对研究胎盘功能是十分必要的。目前，国内外研究多采用三步酶消化法结合免疫磁珠法分离胎盘微血管内皮细胞，然而步骤过于繁琐且对细胞损伤较大。因而，如何简化人胎盘微血管内皮细胞分离步骤，同时又能提高目标细胞纯度的体外培养方法成为研究热点。<br>　　目的：探索一种简便高效的从早期绒毛组织中分离人胎盘微血管内皮细胞的体外培养方法，观察细胞生长状态并进行鉴定。<br>　　方法：利用健康孕6-8周孕妇行人工流产后的绒毛组织，经两步酶消化法和非连续 Percol 密度梯度离心得到人胎盘微血管内皮细胞，传代时利用胰酶消化法和反复贴壁法对细胞进行纯化。<br>　　结果与结论：实验成功获取人胎盘微血管内皮细胞，原代培养的人胎盘微血管内皮细胞在培养24 h后基本完全贴壁，第10天进入对数生长期，第12至13天细胞浓度达80%，传代细胞较原代细胞生长活跃，培养5-7 d可长满培养瓶底，呈“铺路石样”排布。免疫荧光化学结果显示，培养的细胞中 FⅧ因子与 CD31相关抗原双荧光染色呈阳性，细胞阳性率达100%。MTT法测得培养第5代人胎盘微血管内皮细胞的生长曲线呈倒“S”形。结果证实，应用两步酶消化法、非连续 Percol 密度梯度离心法分离细胞，并利用胰酶消化法和反复贴壁法纯化细胞，可获得大量高纯度的人胎盘微血管内皮细胞。