重叠法联合长引物法构建具有HA标签的DJ-1 L166P突变体

• 作者: 朱飞舟 邓梅春 陈汉春 马幸
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因克隆 定点突变 抗原表位标签 DJ-1 帕金森病
• 年，卷（期）: 2014,（19）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-9
• 页数: 4页
• 分类号: Q5
• 字数: 2748字
• 语种: 中文

摘要

目的 通过构建具有HA标签的DJ-1L166P突变体(DJ-1L166P-HA),建立一种快速构建具有标签的突变体的方法——重叠法联合长引物法.方法 PCR分别扩增DJ-1的N端和C端.扩增C端的反向引物D卜1-HA-R包含HA标签的编码序列,是具有60个核苷酸的长引物.然后,DJ-1的N端和C端重叠延伸获得DJ-1L166P-HA全长.最后,克隆DJ-1L166P-HA至质粒pcDNA3.1(+).结果 只需一次连接反应,成功地构建了具有HA标签的DJ-1L166P突变体的重组质粒pcDNA3.1(+)-DJ-1L166P-HA.将该重组质粒转染HEK293细胞后,DJ-1L166P-HA融合蛋白质成功表达.结论 重叠法联合长引物法具有简便、快捷,易掌握等特点,具有良好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈汉春	中南大学生命科学学院生物化学系	26	162	6.0	12.0
2	朱飞舟	中南大学生命科学学院生物化学系	8	77	3.0	8.0
3	马幸	中南大学生命科学学院生物化学系	1	0	0.0	0.0
4	邓梅春	中南大学生命科学学院生物化学系	4	8	2.0	2.0