Pim-3慢病毒质粒构建及其表达鉴定

• 作者: 岳天孚 李咏梅 杜雪 杨柏财 赵曼茵 邱依然 黑凯文
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢癌 Pim-3 丝/苏氨酸激酶 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R737.31
• 字数: 3206字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2014.02.001

摘要

目的 构建Pim-3慢病毒质粒,鉴定其在卵巢癌SKOV3细胞中基因及蛋白水平的表达.方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重组;酶切鉴定及基因测序后,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SKOV3细胞,荧光显微镜下观察转染情况,应用RT-PCR及Western blot法分别检测Pim-3 mRNA及其蛋白.结果 RT-PCR法获得Pim-3基因,重组质粒酶切后片段大小及基因测序结果显示pCDH/Pim-3重组质粒构建成功.将感染重组质粒及空载体的293T细胞生产的病毒上清分别感染SKOV3细胞,感染重组质粒的SKOV3细胞中Pim-3 mRNA及蛋白表达水平均高于空载体细胞.结论 成功构建了pCDH/Pim-3重组慢病毒质粒,建立了Pim-3高表达SKOV3瞬转细胞模型,为探讨Pim-3在卵巢癌发生、发展中的作用及机制奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳天孚		120	770	16.0	21.0
2	李咏梅	天津医科大学基础医学院	17	66	5.0	7.0
3	杜雪		23	82	6.0	8.0
4	赵曼茵		2	9	1.0	2.0
5	黑凯文	天津医科大学基础医学院	3	0	0.0	0.0
6	邱依然	天津医科大学基础医学院	3	11	1.0	3.0
7	杨柏财	天津医科大学基础医学院	2	0	0.0	0.0