滇龙胆1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因GrDXR的克隆、序列分析与原核表达

• 作者: 张晓东 李彩霞 李涛 王元忠 赵静
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 滇龙胆 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因 基因克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（16）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2378-2384
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.16.019

摘要

目的 从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆萜类合成关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因GrDXR,进行序列分析和原核表达.方法 根据滇龙胆转录组中GrDXR基因序列,设计引物,通过RT-PCR扩增得到GrDXR开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrDXR,转入大肠杆菌Rosetta (DE3)中,在IPTG诱导下进行表达.结果 GrDXR ORF全长1 425 bp,编码474个氨基酸.序列分析表明,GrDXR基因是DXR家族成员;蛋白质序列系统发育分析表明,GrDXR与萝芙木RvDXR、橡胶树HbDXR和长春花CrDXR亲缘关系较近.构建pGEX-4T-1-GrDXR重组质粒,获得稳定的原核表达体系.SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致.结论 克隆了GrDXR基因,建立其稳定的原核表达体系,为进一步纯化GrDXR蛋白,研究其结构和功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王元忠	云南省农业科学院药用植物研究所	162	905	14.0	19.0
2	李涛	玉溪师范学院资源与环境学院	70	340	10.0	12.0
3	张晓东	玉溪师范学院资源与环境学院	31	71	5.0	7.0
4	赵静	玉溪师范学院资源与环境学院	14	24	3.0	4.0
5	李彩霞	玉溪师范学院资源与环境学院	19	43	4.0	6.0