肠炎沙门氏菌EMA-PCR检测方法的建立

• 作者: 康大成 李朋颖 汤晓艳 王敏 郑锌 颜成英
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 叠氮溴乙锭 聚合酶链式反应 肠炎沙门氏菌
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 分析检测
• 页码范围: 90-93
• 页数: 4页
• 分类号: TS251.7
• 字数: 3130字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201406018

摘要

将荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术相结合,用于肠炎沙门氏菌活菌的检测.实验参数优化结果表明,当EMA终质量浓度50μg/mL、曝光时间10 min时,可以抑制约107 CFU/mL肠炎沙门氏菌死菌DNA的扩增;活菌灵敏度检测结果显示,EMA-PCR方法检测限与单一PCR方法一样均为27.5 CFU/mL,说明EMA处理既不会影响活菌DNA的扩增也不会影响PCR方法的灵敏度.利用EMA-PCR方法检测死活混合菌液时发现,添加EMA的实验组DNA条带亮度会随着活菌比例的降低而变暗,且当样品中全是死菌时,没有目标条带出现;而不添加EMA的对照组DNA条带亮度没有变化,当样品中全是死菌时,目标条带依然清晰可见.说明添加EMA可以达到区分死活菌的目的,EMA-PCR方法只检测样品中的活菌,避免了死菌DNA造成假阳性的可能性.