稳定表达大鼠GCLC启动子及荧光素酶报告基因细胞株的建立

• 作者: 付欣 周问渠 李冰 洪玮 蔡磊 黄楚琴
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC) 启动子 荧光素酶报告基因 稳定细胞株
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1225-1228
• 分类号: Q95-3|Q78|R322.35
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.07.006

摘要

目的:建立稳定表达大鼠谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)启动子及荧光素酶报告基因的大鼠肺泡上皮细胞株.方法:克隆大鼠GCLC上游5.9kb的启动子序列并构建重组报道载体PGL4.19-GCLC-LUC,转染到大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞L2,经G418筛选以获得单细胞抗性克隆并在传代过程中能稳定表达荧光素酶活性;检测细胞荧光素酶表达与细胞数量相关性;PCR检测稳定细胞株基因组已整合的插入片段;刺激因子刺激6h,检测稳定细胞株的反应性.结果:成功构建PGL4.19-GCLC-LUC;构建的稳定细胞株能稳定地表达荧光素酶,且与细胞数量正相关;PCR检测稳定细胞株目的片段稳定整合基因组;TNF-α刺激后,能使荧光素酶活性上升,差异有统计学意义(P＜0.05);Rapamycin,GSH-EE刺激后,荧光素酶活性显著下降(P.＜0.05).结论:成功构建稳定表达大鼠GCLC启动子及荧光素酶报告基因的细胞株,将为高通量药物筛选以及进一步研究GCLC基因的转录调控提供重要的细胞研究手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李冰	广州医科大学实验医学研究中心	21	30	3.0	4.0
2	付欣	广州医科大学实验医学研究中心	9	12	2.0	3.0
3	周问渠	广州医科大学实验医学研究中心	4	7	2.0	2.0
4	洪玮	广州医科大学实验医学研究中心	11	10	2.0	3.0
5	黄楚琴	广州医科大学实验医学研究中心	2	1	1.0	1.0
6	蔡磊	广州医科大学实验医学研究中心	2	1	1.0	1.0