不同标签辅助的IBTX原核表达纯化及活性鉴定

• 作者: 刘浩文 吴颖 张峥 赵志文 黄智刚
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 钾离子通道毒素 IBTX 标签蛋白 BK
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1207-1211
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.07.002

摘要

目的:在原核体系中建立高效表达纯化IBTX(Iberiotoxin)的工艺,并比较不同标签对IBTX生物活性的影响.方法:利用引物搭桥的方法,经PCR扩增,获得IBTX编码基因,以此为模板分别构建了表达质粒PET32a(+)-IBTX、pGex-6p-1-IBTX、pDuet-MBP-IBTX,并将其转入E.coli (BL21)分别表达带有硫氧还原蛋白(TRX)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的IBTX融合蛋白,在经过亲和层析、烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶酶切、C18反向层析纯化后真空冻干得到IBTX干粉,以电生理实验检测其生物活性.结果:在三种标签帮助下通过原核体系表达出的IBTX都能够特异性的阻断大电导Ca2+激活的钾通道(BK)电流,其中MBP帮助折叠的m-IBTX活性最佳.结论:建立了IBTX在MBP标签帮助下的原核表达纯化工艺,为进一步研究蝎钾离子通道α家族神经毒素及其突变体的原核表达奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴颖	华中科技大学生命科学与技术学院	30	56	4.0	7.0
2	赵志文	华中科技大学生命科学与技术学院	2	3	1.0	1.0
3	黄智刚	华中科技大学生命科学与技术学院	3	1	1.0	1.0
4	张峥	华中科技大学生命科学与技术学院	1	1	1.0	1.0
5	刘浩文	华中科技大学生命科学与技术学院	1	1	1.0	1.0