河南华溪蟹金属硫蛋白分泌型表达载体的构建、表达及纯化

• 作者: 何永吉 刘进平 王兰
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 河南华溪蟹 金属硫蛋白 表达
• 年，卷（期）: 2014,（17）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 128-132
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4497字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201417026

摘要

目的:构建河南华溪蟹金属硫蛋白(metallothionein,MT)分泌型表达载体并诱导其可溶表达.方法:采用基因重组技术,将河南华溪蟹MT基因亚克隆至碱性磷酸盐启动子(alkaline phosphatase promoter,phoA)分泌型原核表达载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3),通过低磷酸盐诱导重组蛋白表达,经Ni2+螯合柱分离纯化后,利用紫外光谱扫描分析、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)及Western blotting检测鉴定重组MT.结果:phoA-MT分泌型表达载体构建成功,工程菌经低磷酸盐诱导后重组MT以可溶形式获得表达,紫外光谱扫描和Western blotting证实表达产物的正确性,SDS-PAGE分析其纯度较高,主要以单体和二聚体的形式存在,其分子质量分别约为7.5、15 kD.结论:成功实现了河南华溪蟹MT的重组表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王兰	山西大学生命科学学院	123	1118	16.0	28.0
2	何永吉	山西大学生命科学学院	8	146	5.0	8.0
3	刘进平	山西大学生命科学学院	3	10	2.0	3.0