AlphaLISA法检测乙型肝炎病毒X蛋白方法学的建立

• 作者: 刘松梅 刘颖娟 周新 夏维 张红 沈璠
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 医学
• 关键词: AlphaLISA 乙型肝炎病毒 X蛋白 原发性肝细胞癌
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1748-1751
• 页数: 4页
• 分类号: R446
• 字数: 2933字
• 语种: 中文

摘要

目的：建立新型的均相检测技术AlphaLISA（Amplifed Luminescent Proximity Homogeneous Assay）法，检测原发性肝细胞癌（Hepatocelluar carcinoma，HCC）病人石蜡包埋切片组织（Formalin-fixed and paraffin-embedded tis-sue，FFPE）中乙型肝炎病毒 X蛋白（HBx）。方法采用针对 HBx蛋白不同表位的两种单克隆抗体 X36C和3F6-G10，将其中一种抗体 X36C与受体微珠（Acceptor Beads）连接，另一种抗体3F6-G10生物素化，再将 HCC病人 FFPE总蛋白提取液、供体微珠（Donor Beads）及上述两种处理后的抗体在23℃共同孵育90 min后，用 EnSpire2300多功能酶标仪检测信号值。结果 FFPE 蛋白提取液检测信号值为4667，HBx蛋白标准品检测信号值为3606；FFPE蛋白提取液样本对照、试剂对照1（Bio-3F6-G10＋Acceptor-X36C＋Donor Beads）、试剂对照2（buffer）的信号值分别为5、823、79；当生物素化抗体浓度为0．1625nM时，HBX检测信号达到最大峰值，即 AlphaLISA出现 Hooking Effect；Al-phaLISA法检测 HBX阈值下限为5pg。结论本实验成功建立了 AlphaLISA法，用于检测 HCC病人 FFPE中的HBX。实验操作过程简单快捷，敏感性高于传统的 ELISA技术。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘松梅	武汉大学中南医院医学科学研究中心	27	89	6.0	7.0
5	周新	武汉大学中南医院基因诊断中心	191	1214	16.0	27.0
6	刘颖娟	武汉大学中南医院医学科学研究中心	10	73	3.0	8.0
7	张红	湖北省黄石普仁医院内科	18	62	4.0	7.0
8	夏维	武汉市妇女儿童医疗保健中心检验部	9	37	3.0	5.0
9	沈璠	武汉大学中南医院基因诊断中心	1	1	1.0	1.0