白蜡属SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

• 作者: 刘翠兰 夏阳 孙超 屈星 李丽 燕丽萍 王健兵
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 白蜡 SSR-PCR 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 林学—研究报告
• 页码范围: 35-41
• 分类号: Q-31
• 语种: 中文

摘要

本研究建立了适合白蜡SSR-PCR反应的最佳体系,并利用该体系从50对白蜡引物中筛选出了3对条带清晰、多态性好的引物,用于白蜡SSR标记的进一步研究.该研究采用L16(45)正交设计和单因素试验对影响白蜡SSR-PCR的Taq聚合酶用量、Mg2+浓度、DNA模板浓度、dNTP浓度和引物浓度等5个因素在4水平上进行筛选.优化后的白蜡SSR反应体系为:Mg2+ (25 mmol/L) 0.8 μL、引物(10 μmol/L)0.2 μL、DNTP (10 mmol/L) 0.3 μL、Taq酶(5 U/μL)0.05μL、DNA模板(5～10 ng/μL) 2.00 μL、10×PCR缓冲液1.0 μL,ddH2O 5.45 μL,总体积10.0μL.该结果为今后利用SSR-PCR标记技术研究分析白蜡奠定了基础.