水稻HL-CMS细胞质雄性不育基因的体外转录及Northern Blot检测

• 作者: 刘京 刘学群 华宇峰 王春台 谭艳平
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻 红莲型细胞质雄性不育 体外转录 Northern Blot
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 3497-3498,3501
• 页数: 3页
• 分类号: S511|Q37
• 字数: 2202字
• 语种: 中文

摘要

[目的]通过基因克隆和体外转录技术获得水稻红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)不育系粤泰A(YTA)中的2个细胞质雄性不育基因orf216和orf79的RNA,为Northem Blot检测提供阳性定量标准品,并可作为凝胶阻滞试验的底物,用于研究与恢复基因编码产物的相互作用,从而为阐释不育基因与恢复基因的相互作用分子机制奠定基础.[方法]以红莲型胞质雄性不育基因orf216和orfH79的特异引物,利用不育乐YTA为材料,PCR扩增获得相应片段,分别连接至pGEM-T Easy质粒并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,补平粘性末端,以rN4为底物、用依赖于DNA的RNA聚合酶进行体外转录,转录产物用DNase处理除去DNA模板,纯化并测定RNA浓度,并用Northem Blot验证.[结果]获得了细胞质雄性不育基因orf216和orfH79各自的RNA,经检测orf216浓度为1.286ug/ul,A260/A280为2.01;orfH79浓度为1.006μ/ul,A260/A280为2.10.[结论]运用体外转录技术获得的RNA片段条带单一,纯度较高,可用于体外大量获取目的RNA.