乳腺干细胞培养基的建立及有效性验证

• 作者: 张军红 李青 杨晶 王春华 豆晓伟 赵春华
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 培养 乳腺干细胞 成纤维细胞 Sca-1 乳腺干细胞培养基 国家重大科学研究计划(973)资助项目 863项目
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 1585-1590
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6148字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.10.017

摘要

背景：干细胞培养基，尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的：利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。<br>　　方法：用BM培养基培养乳腺器官样小体，6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选出MaECM培养基，培养乳腺细胞6 d后，免疫磁珠筛选Sca-1+和Sca-1-细胞群，流式细胞术分析Sca-1阳性细胞的纯度，1×104 Sca-1+或Sca-1-细胞种植在4只鼠双侧乳腺脂肪垫上，6-8周后取出乳腺脂肪垫，以卡红整体染色和苏木精-伊红染色分析长出乳腺的结构数量。<br>　　结果与结论：乳腺器官样小体用BM培养基培养6 d后，检测到大量Sca-1和vimentin阳性的成纤维细胞，说明BM培养基不适合分离Sca-1+乳腺干细胞。筛选出的MaECM培养基能够抑制成纤维的生长。磁珠筛选后，流式细胞术检测Sca-1+细胞在Sca-1+和Sca-1-细胞群的纯度分别是92%和5%。移植实验显示在8个种植Sca-1+细胞的脂肪垫生长出6个乳腺结构；而在8个种植Sca-1-细胞的脂肪垫中除1只鼠死亡，其余脂肪垫中均未长出乳腺结构。提示MaECM培养基适用于培养鼠乳腺干细胞。