利用SSR快速鉴定甜菜品种纯度和真实性的研究

• 作者: 吴则东 王华忠 王茂芊 马龙彪
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 甜菜 SSR标记 快速鉴定 体系优化
• 年，卷（期）: 2014,（31）
• 所属期刊栏目: 园艺—应用研究
• 页码范围: 214-218
• 分类号: S566.3
• 语种: 中文

摘要

为建立一套快速鉴定甜菜品种纯度和真实性的实验体系,对DNA的提取、检测、PCR反应体系、程序、电泳以及显影方法等多个方面进行了优化,最终确立了一套简单、快速、节约、污染小的甜菜品种纯度和真实性的鉴定体系.该方法使用96孔PCR板,利用碱裂解法提取干种子(或者叶片干粉)DNA;使用无毒的Gelred替代致癌性的EB,利用λDNA检测提取样品DNA的浓度;PCR反应的体系为5μL,使用多重PCR替代单一PCR;PCR反应程序为94℃变性15s,退火15s,72℃延伸30 s,30个循环,最后72℃延伸5 min;PCR产物的分离使用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后使用快速银染法对电泳后的聚丙烯酰胺凝胶进行显影.利用优化后的程序,一位成熟的实验室操作人员只需1天就可以完成192份样品的检测.