LPS通过调节Cdc2蛋白表达诱导HeLa细胞凋亡的研究

• 作者: 周辉 赵丽君 赵明
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: 细胞周期蛋白质类 周期素依赖性激酶1 细胞凋亡 细胞周期
• 年，卷（期）: 2014,（16）
• 所属期刊栏目: 论著?基础研究
• 页码范围: 2012-2015
• 页数: 4页
• 字数: 4267字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2014.16.015

摘要

目的：构建细胞分裂周期蛋白2（Cdc2）真核表达载体，并在 P16基因缺失的肿瘤细胞 HeLa细胞中表达，利用 LPS诱导细胞凋亡，并探讨 LPS诱导 HeLa细胞凋亡的机制。方法从人 U2OS细胞中提取 RNA，反转录克隆 Cdc2 cDNA片段，利用Gateway技术构建 pDEST27-Cdc2质粒。将 pDEST27-Cdc2质粒瞬时转染人宫颈癌 HeLa细胞，免疫印迹分析 Cdc2的表达情况，并用 LPS刺激，观察其对 LPS引起的细胞凋亡和细胞周期的影响。结果成功构建 pDEST27-Cdc2质粒，质粒酶切及测序结果完全正确。LPS刺激 HeLa细胞24 h后，流式细胞仪检测发现大量细胞凋亡，而转染pDEST27-Cdc2质粒的细胞凋亡率明显降低，提示Cdc2的重要作用。免疫印迹分析研究发现，LPS诱导 HeLa细胞 Cdc2蛋白水平下降，进一步研究发现 LPS诱导 HeLa细胞 G2/M期阻滞，过表达Cdc2可以降低 G2期细胞阻滞的发生。结论 LPS诱导 HeLa细胞凋亡是由于其导致 Cdc2表达下降，细胞分裂停止在 G2/M期，过表达Cdc2可以阻止死亡信号诱导的细胞凋亡。