双基因重组腺病毒载体的构建及转染大鼠骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤

• 作者: 孙飞 徐艳梅 惠春影 王维
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 干细胞移植 骨髓间充质干细胞 脊髓损伤 脑源性神经生长因子 低氧诱导因子1α 血管内皮生长因子
• 年，卷（期）: 2014,（23）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞移植
• 页码范围: 3645-3652
• 页数: 8页
• 分类号: R394.2
• 字数: 8385字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.23.007

摘要

背景：脑源性神经生长因子对多巴胺能神经元、胆碱能神经元等多种神经元都有广泛作用，能促进干细胞更多的向神经元样细胞分化；低氧诱导因子1α可提高组织和细胞在缺血环境下的生存能力，维持局部成血管微环境方面比任何基因均有更广泛的生理作用。目的：通过构建脑源性神经生长因子联合三点突变型低氧诱导因子1α双基因重组腺病毒载体，探索其转染大鼠骨髓间充质干细胞后2种基因在体外常氧条件下对脊髓损伤促神经再生及血管新生的作用。方法：①利用PCR方法定点突变人低氧诱导因子1α编码区的第402、564和803位氨基酸，将突变后低氧诱导因子1α基因联合脑源性神经生长因子重组入腺病毒pAdEasy-1系统，包装病毒并测定滴度。②以4种病毒液连同空白组共分5组进行后续实验；将病毒液转染入骨髓间充质干细胞内观察转染效率，检测各组转染细胞中脑源性神经生长因子基因及低氧诱导因子1α mRNA和蛋白表达情况。③进一步通过Western blot方法检测各组细胞中低氧诱导因子1α的下游成血管基因血管内皮生长因子蛋白表达情况。结果与结论：①编码区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸；4种腺病毒重组体构建成功并包装鉴定完毕。②实验组、阳性对照组1脑源性神经生长因子 mRNA及蛋白表达量明显高于其他组(P<0.05)；实验组、阳性对照组2细胞内低氧诱导因子1α mRNA及蛋白表达量、血管内皮生长因子蛋白表达均明显高于其他3组(P<0.05)。结果说明单载体双基因腺病毒系统转染骨髓间充质干细胞后不仅能够在常氧条件下大量且高效表达脑源性神经生长因子及低氧诱导因子1α蛋白，还同时能够促进其下游血管内皮生长因子的高效表达，为基因联合细胞移植治疗脊髓损伤提供了一种新的方向。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王维	辽宁医学院附属第一医院康复医学科	14	115	7.0	10.0
2	徐艳梅	辽宁医学院附属第一医院重症医学科	1	2	1.0	1.0
3	孙飞	辽宁医学院附属第一医院急诊科	4	9	2.0	3.0
4	惠春影	辽宁医学院附属第一医院心脑外科	3	3	1.0	1.0