天冬氨酸激酶突变体G277K中AK基因的克隆表达及酶学性质表征

• 作者: 任军 方丽 朱运明 李慧颖 詹冬玲 闵伟红
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 天冬氨酸激酶 克隆表达 定点突变 酶学性质
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 149-154
• 页数: 6页
• 分类号: Q814.9
• 字数: 5207字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201411030

摘要

通过序列比对和晶体结构分析发现,天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)的G277位点高度保守,并与抑制剂Thr通过氢键相连,对其进行定点突变和酶学性质表征.结果表明:突变体G277K的AK最适反应条件是30℃、pH 8.5;动力学实验结果显示突变体AK的正协同效应降低,趋向于米氏酶,参数S0.5、nH、酶比活力、Vmax分别是7.05 mmol/L,1.24、964.3 U/mg、32.143U/(mg·min);热稳定性实验显示,其30℃半衰期为2.3h,3h后酶活力丧失80％左右;Ni2+在低浓度时表现出显著的激活效应;有机溶剂丙三醇、异丙醇和二甲基亚砜的体积分数为1％时,对AK的酶活力有很好的激活作用,表明突变体AK对一些有机溶剂有一定的抗性;低浓度的赖氨酸和蛋氨酸对AK有激活作用.