荔枝SCoT-PCR反应体系的建立及其在遗传分析中的应用

• 作者: 刘成明 夏玲 秦永华 胡桂兵
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 荔枝 分子标记 目标起始密码子多态性(SCoT) 遗传分析
• 年，卷（期）: 2014,（13）
• 所属期刊栏目: 园艺—研究报告
• 页码范围: 147-156
• 分类号: S667.1
• 语种: 中文

摘要

建立适于荔枝的SCoT反应体系,并利用SCoT体系对‘紫娘喜’、‘无核荔’及其杂交后代进行真假杂种鉴定和遗传多样性分析.采用正交设计方法对影响荔枝SCoT-PCR反应的rTaq酶、Mg2+浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物等因素进行体系优化.优化的荔枝SCoT反应体系为:20 μL反应体系中含有模板DNA 30 ng,rTaq酶1U,引物0.75 μmol/L,Mg+3 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L.最适退火温度为50.6℃.利用该体系对‘紫娘喜’、‘无核荔’及其杂交后代进行遗传分析,结果显示,32条引物共扩增出280个位点,多态性位点有131个,占总位点数46.78％.4条引物就可以将60株杂交后代鉴定出来.UPGMA聚类分析显示,SCoT标记能将30株杂交后代区分开,遗传相似系数在0.406～0.867,在相似系数0.68时,30株杂交后代可聚为3类.优化建立的荔枝SCoT体系结果稳定,重复性好,为荔枝遗传育种提供了新的技术支持.