PCR在HBV核酸定量检测中的应用

• 作者: 姚丽 巩丽 张伟 张佳瑞 朱少君 李艳红 王姝妹 韩秀娟
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 竞争性PCR 拉米夫定 fRNA trRNA
• 年，卷（期）: 2014,（28）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5424-5426
• 分类号: R512.6+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.28.006

摘要

目的:探索一种简便定量分析系统,通过检测HBV携带者血清中的HBVX区DNA,fRNA和trRNA拷贝数,为提高隐匿性感染期低复制状态HBV检测效果提供可能.方法:从血清中提取HBV DNA和RNA,对Core区、X区DNA进行PCR扩增,使用半巢式PCR法对fRNA 、trRNA在同一离心管中进行反转录并扩增,选取大小相近的质粒作为竞争模板对其进行定量.并对拉米夫定干预治疗14周前后的患者血清中HBV XDNA、Core DNA、fRNA和trRNA拷贝数进行检测与比较.所有检测结果均通过southern杂交进行验证.结果:建立了针对DNA的定量分析系统及针对RNA的RT-PCR定量分析系统,并且阐明了阿米夫定治疗前后HBV DNA和X区RNA结构和数量的变化.治疗前治疗后DNA和RNA的拷贝数均下降.Core DNA下降显著,为103-104倍,而XDNA拷贝数下降102倍.而fRNA和trRNA仅有小幅下降,为10倍左右.结论:可以通过竞争性PCR方法对血清中HBV DNA和RNA进行定量检测,以期为HBV病毒的诊断提供更充足依据.