miR-424慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖的影响

• 作者: 代晓燕 任涛 卿毅 戴楠 李清 杨宇馨 王东
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: Hela 细胞 细胞增殖 miR-424 慢病毒表达载体
• 年，卷（期）: 2014,（31）
• 所属期刊栏目: ? 论 著 ?
• 页码范围: 4165-4168
• 页数: 4页
• 分类号: R737.33
• 字数: 3323字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2014.31.016

摘要

目的：构建hsa‐miR‐424基因慢病毒表达载体，并鉴定miR‐424在细胞内表达水平，研究hsa‐miR‐424对宫颈癌 He‐la 细胞增殖的影响。方法以人基因组 DNA 为模板，设计合成 miR‐424的上下游引物，PCR 扩增目的片段，回收产物将其连入pMD18T 载体中，进行测序。再以 pMD18T‐miR424为模板进行 PCR 扩增，将其中表达 pMD18T‐miR424的结构经酶切后插入pLentis‐CMV‐GFP‐MCS‐PGK‐PURO 载体，构建成 pLentis‐CMV‐GFP‐miR424‐PGK‐PURO ，在293T 细胞中与 pSPAX2、pMD2．G包装产生所需的慢病毒，再用含慢病毒的上清液感染 Hela 细胞。结果 miR‐424基因与慢病毒载体连接成功，测序结果证明了插入到质粒载体中的 miR‐424前体序列完全正确，成功构建 pLentis‐CMV‐GFP‐miR424重组慢病毒载体，用其感染宫颈癌Hela 细胞后上调 miR‐424的表达近60倍。采用 M TT 法检测增殖结果提示：感染 miR‐424慢病毒的宫颈癌 Hela 细胞株均存在细胞增殖减慢。结论成功的构建了 miR‐424慢病毒载体，建立了高效稳定表达 miR‐424的细胞株，并用含慢病毒的上清液感染宫颈癌 Hela 细胞，成功抑制了 Hela 细胞的增殖，为后续相关的研究奠定了良好的基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王东	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心	183	1193	17.0	23.0
2	李清	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心	17	115	4.0	10.0
3	杨宇馨	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心	19	134	7.0	11.0
4	戴楠	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心	13	48	5.0	6.0
5	代晓燕	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心	2	6	2.0	2.0
6	任涛	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心	2	5	2.0	2.0