鲢鱼重组Cystatin的原核表达、鉴定及对铜绿假单胞菌的抑制作用

• 作者: 任阳阳 何杰 吴睿 姜海洋 李冉 李树红 肖安蓬 陈海 马璐阳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 鲢鱼 原核表达 鉴定 铜绿假单胞菌 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2014,（21）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 133-137
• 页数: 5页
• 分类号: TS254.1
• 字数: 3997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201421026

摘要

本实验主要对鲢鱼半胱氨酸蛋白酶抑制因子Cystatin进行原核表达和纯化鉴定,并研究重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果.首先用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导转入pET-30-Cystatin的E.coli BL21 (DE3)表达重组Cystatin蛋白,经Ni2+-NTA镍离子亲和层析对其进行纯化,该重组蛋白在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示单一条带,分子质量约20.6 kD,在TSK-GEL G2000SW凝胶过滤高效液相色谱上呈单一活性峰,纯度为94.27％,经标准曲线计算其分子质量为20.9 kD;其次,利用抑制剂滴定曲线法,以偶氮酪蛋白为底物,确定重组Cystatin对木瓜蛋白酶(45.375 μmol)的一个抑制活性单位为0.718 μg;最后通过滤纸片扩散法鉴定鲢鱼重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果,结果表明Cystatin的添加量为20、60、120、200 U/片时,抑菌圈直径分别为8、9、13、26 mm.鲢鱼重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果呈剂量依赖关系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李冉	四川农业大学食品学院	15	21	3.0	4.0
2	何杰	四川农业大学食品学院	12	92	7.0	9.0
3	任阳阳	四川农业大学食品学院	4	17	3.0	4.0
4	马璐阳	四川农业大学食品学院	3	7	1.0	2.0
5	肖安蓬	四川农业大学食品学院	3	14	3.0	3.0
6	陈海	四川农业大学食品学院	5	16	3.0	4.0
7	姜海洋	四川农业大学食品学院	4	10	2.0	3.0
8	吴睿	四川农业大学食品学院	3	10	2.0	3.0