促红细胞生成素促进内皮祖细胞增殖依赖于PI3K/Akt信号通路

• 作者: 吴海卫 张雷 景华 李好 李德闽 胡若愚 董国华 许飚
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 培养 内皮祖细胞 促红细胞生成素 磷脂酰肌醇3-激酶 信号通路 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2014,（45）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 7312-7319
• 页数: 8页
• 分类号: R394.2
• 字数: 9741字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.45.018

摘要

背景：促红细胞生成素能促进组织损伤部位血管生成，与其促进内皮祖细胞增殖、分化密切相关，但促红细胞生成素促进内皮祖细胞增殖、分化的机制尚不清楚。<br>　　目的：观察促红细胞生成素对小鼠骨髓来源内皮祖细胞功能活性的影响，并初步阐明其信号机制。<br>　　方法：密度梯度离心法分离获取小鼠骨髓内皮祖细胞，鉴定后传代培养，以 PI3K 特异性抑制剂 LY294002作干预处理，实验细胞分为EGM-2组、促红细胞生成素处理组(培养液中促红细胞生成素浓度分别为1，5，10 U/mL)、促红细胞生成素+LY组(培养液中分别含有10 U/mL促红细胞生成素及10 mmol/L LY294002)、LY组(培养液中含10 mmol/L LY294002)、二甲基亚砜组(培养液中含1 mL/L二甲基亚砜)，分别采用CCK8试剂盒、流式细胞法检测细胞增殖和凋亡，采用ELISA法检测细胞裂解液内皮型一氧化氮合酶、血管内皮生长因子含量，Western blot法测定细胞裂解液中Akt及p-Akt表达。<br>　　结果与结论：促红细胞生成素能显著促进内皮祖细胞增殖，并随培养基中促红细胞生成素含量增加而呈现量效关系，而促红细胞生成素的促增殖作用可被 LY294002完全抑制。促红细胞生成素处理组细胞凋亡率明显低于促红细胞生成素+LY组。LY组、促红细胞生成素+LY组细胞裂解液中内皮型一氧化氮合酶、血管内皮生长因子含量显著低于促红细胞生成素处理各组。各组 Akt 表达无明显差异，而促红细胞生成素+LY 组 p-Akt表达显著低于促红细胞生成素各组。上述结果提示，促红细胞生成素能显著促进体外培养的内皮祖细胞的增殖、降低内皮祖细胞的凋亡率，其作用依赖于PI3K/Akt信号通路。