小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备

• 作者: 王妍妍 胡三强 胡嘉波 马永宾
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 培养 人胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 饲养层 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2014,（45）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 7306-7311
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 7103字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.45.017

摘要

背景：建立一种既可以大量制备，又易于保存并保持较高活性的饲养层细胞是人胚胎干细胞培养研究的重要环节。<br>　　目的：建立昆明小鼠胚胎成纤维细胞的最佳分离培养方法，评价其用于人胚胎干细胞饲养层研究的可行性。方法：用不同浓度胰蛋白酶分步消化法体外分离和培养昆明小鼠胚胎成纤维细胞，观察其生物学特性，制备胚胎成纤维细胞饲养层，检测人胚胎干细胞在饲养层上培养的生长状态。<br>　　结果与结论：制备昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄为13.5 d。不同浓度胰蛋白酶分步消化法制备的胚胎成纤维细胞生长状态好，获得的成纤维细胞纯度高，增殖活跃。冻存2周，1，3，6个月内复苏的细胞存活率差异无显著性意义。小鼠胚胎成纤维细胞在第2-4代增殖旺盛，第5代以后细胞增殖活力明显下降。人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞长期传代后呈典型的未分化形态，碱性磷酸酶和过碘酸-雪夫染色均为阳性。结果表明建立的昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层分离培养法可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡嘉波	江苏大学医学院	65	440	11.0	17.0
2	王妍妍	江苏大学医学院	3	11	2.0	3.0
3	马永宾	江苏大学医学院	8	16	2.0	3.0
4	胡三强	连云港市妇幼保健院检验科	4	36	3.0	4.0