慢病毒载体介导绿色荧光蛋白转染大鼠牙髓干细胞

• 作者: 刘佳 刘奕杉 孙大磊 张瑞涵 李伯琦 热甫卡提·地力毛拉提 王璇 聂姗姗
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 分化 牙髓干细胞 慢病毒载体 绿色荧光蛋白 大鼠 转染 组织工程 新疆维吾尔自治区自然科学基金
• 年，卷（期）: 2014,（45）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 7299-7305
• 页数: 7页
• 分类号: R394.2
• 字数: 8337字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.45.016

摘要

背景：对牙髓干细胞进行稳定高效安全的体外标记是示踪技术中首先需要解决的问题，也是牙齿再生体内研究的基础。<br>　　目的：探讨慢病毒载体介导绿色荧光蛋白转染大鼠牙髓干细胞的理想条件及方法，并确定其转染后是否保持干细胞特性。<br>　　方法：通过改良酶消化法获得大鼠牙髓干细胞，对其免疫表型及分化潜能进行鉴定，以感染复数为5，10，25，50和100的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白作用24 h和48 h，倒置显微镜下检测转染率和荧光强度，并对大鼠牙髓干细胞感染前后的克隆增殖能力、细胞周期及牙向分化能力进行比较，评价感染对其生物学特性的影响。<br>　　结果与结论：流式细胞仪检测结果显示大鼠牙髓干细胞STRO-1和CD146表达阳性，CD34和CD45表达阴性，经相应诱导培养后可向成骨和成脂分化。当感染复数为50，作用时间为48 h时，转染效率最高，荧光表达最强；感染前后细胞增殖、克隆形成率及细胞周期等方面差异无显著性意义(P>0.05)，碱性磷酸酶阳性表达。说明感染复数为50作用48 h是慢病毒载体介导绿色荧光蛋白转染大鼠牙髓干细胞的理想条件，且不影响牙髓干细胞生物学特性，为大鼠牙髓干细胞的体内研究提供了可靠的示踪方法。