刺槐EST-SSR标记PCR反应体系的优化

• 作者: 孙宇涵 孙文婷 张江涛 王少明 王玉玲 荀守华 董黎 袁存权 赵克奇
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 剌槐 EST-SSR PCR反应体系
• 年，卷（期）: 2014,（22）
• 所属期刊栏目: 林学——研究报告
• 页码范围: 45-52
• 分类号: S792.27
• 语种: 中文

摘要

为建立一套适用于刺槐EST-SSR标记的PCR反应体系,采用L16(45)正-交试验设计结合单因素试验,对刺槐EST-SSR PCR反应体系中的5个主要因素:引物、DNA模板、dNTPs、Mg2+和TaqDNA聚合酶进行优化试验.结果表明:在20μL反应体系中,各反应因素的最佳水平为0.5 μmol/L引物、30 ng模板DNA、0.15 mmol/L dNTP、0.5 mmol/L Mg2+、1.0 UTaq DNA聚合酶.利用随机挑选的3个刺槐优良无性系品种和7对EST-SSR引物对优化体系进行验证,结果均能获得稳定、清晰的条带,证明该体系稳定可靠.此优化体系的建立为刺槐EST-SSR标记的开发以及利用EST-SSR标记深入研究和利用中国刺槐种质资源奠定基础.