Six2基因shRNA敲减慢病毒表达载体及其稳定细胞株的构建

• 作者: 亢小玉 高锦
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: Six2 胶质细胞系源性神经营养因子 慢病毒 载体构建 基因敲减
• 年，卷（期）: 2014,（42）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: R394.3|R742.5
• 字数: 3044字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2014.42.002

摘要

目的：筛选并包装Six2基因shRNA敲减的慢病毒，建立稳定表达敲减Six2基因的黑质多巴胺能神经元MES23．5细胞系。方法合成三种（分别命名为pLV-shSix2-1、pLV-shSix2-2、pLV-shSix2-3）含敲减Six2基因干扰序列的双链DNA oligo，并将其连接于含有嘌呤霉素抗性的pLV-H1-EF1a载体质粒，均采用慢病毒包装四质粒系统（pRRE/pVSVG/pREV/pLV）包装并转染腺病毒 E1A 基因的人肾上皮细胞系（293T 细胞）以获取慢病毒 pLV-shSix2。收集敲减Six2基因的pLV-shSix2-1、pLV-shSix2-2、pLV-shSix2-3慢病毒质粒及对照质粒上清，感染黑质多巴胺能神经元细胞（MES23．5细胞），分别设为pLV-shSix2-1组、pLV-shSix2-2组、pLV-shSix2-3组及对照组，Western blot法检测各组细胞 Six2蛋白表达，鉴定各组Six2干扰序列的敲减效果。嘌呤霉素法筛选稳定敲减 Six2的MES23．5细胞株。结果酶切结果表明在262 bp及约9000 bp处分别有明显条带，测序结果显示所测序列与敲减的Six2干扰序列完全一致。 Western blot结果显示干扰序列shSix2-2对应的细胞中Six2蛋白表达显著降低，shSix2-1和shSix2-3蛋白表达降低效果不明显。用嘌呤霉素筛选病毒感染的pLV-shSix2-2组细胞系成功。结论成功构建并筛选了Six2基因shRNA敲减慢病毒表达载体，建立了稳定敲减Six2基因的MES23．5细胞株。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高锦		12	4	1.0	2.0
2	亢小玉		3	1	1.0	1.0