家蚕的蜕皮激素受体和超气门蛋白在大肠杆菌中的共表达和纯化

• 作者: 唐诗蕊 王旻 王涛
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 蜕皮激素受体 超气门蛋白 共表达 色谱柱分离纯化 20-羟基蜕皮激素 活性分析 SDS-PAGE MicroCal iTC200
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 198-202
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

构建蜕皮激素受体(Ecdysteroid receptor,EcR)和超气门蛋白(Ultraspiracle,USP)的表达载体,使两者在大肠杆菌内高效共表达,获得具有活性的目的蛋白,即EcR和USP的复合蛋白(EcR-USP).将N端带有6×His tag的EcR目的基因片段克隆于pET21bMDX12(+)载体内,将N端带有6×His tag的USP目的基因片段克隆于pET28a(+)载体内,并将两个重组质粒同时转化入同一宿主菌BL21(DE3)内利用IPTG低温诱导双基因共表达,选用“超声破碎法”提取共表达蛋白,色谱柱纯化,SDS-PAGE和Western Blot分析纯化结果,MicroCal iTC200法与小分子化合物20-羟基蜕皮激素(20-hydroxyecdysone,20E)相互作用进行活性分析.SDS-PAGE与Western Blot分析结果显示宿主菌中表达产物存在蛋白复合体,大小与预期相符,MicroCal iTC200实验显示EcR-USP与20E有结合,即EcR-USP有活性.得到有活性的家蚕的EcR-USP的可溶性表达产物,为进一步对其进行结构与功能的研究奠定了基础.