人偏肺病毒F1 、F2亚单位原核表达系统的构建及多克隆抗体制备

• 作者: 刘英华 孔梅 李晓燕 苏旭 邹明 郭丽茹
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 医学
• 关键词: 人偏肺病毒 F1、F2亚单位 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 964-968
• 分类号: R373.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2015.11.017

摘要

目的 构建人偏肺病毒融合蛋白亚单位F1、F2原核表达系统,初步获得抗F1、F2重组蛋白的多克隆抗体,为相关疫苗的研究奠定基础.方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增F1、F2基因片段,经T-A克隆确保其准确性,双酶切后插入原核表达载体pET32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),按优化后条件大量诱导表达,纯化后经Western Blot检测特异性.取纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA法检测效价,间接免疫荧光法(IFA)检测多克隆抗体是否能与人偏肺病毒发生特异性反应.结果 F1、F2基因均正确插入pET32a(+)中,并具有正确的读码框架.0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导培养5h可获得大量带His标签的重组蛋白,纯化后浓度分别达到200 μg/ml和300 μg/ml.Western Blot结果显示,重组蛋白可被抗His标签抗体特异识别;免疫小鼠获得多克隆抗体效价分别为抗pET32a-F1最高1:640,抗pET32a-F2最高1:40 960.IFA显示抗pET32a-F1、抗pET32a-F2多克隆抗体均可与人偏肺病毒作用产生特异性荧光.结论 成功构建了F1、F2的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中获得高效表达,该蛋白具有良好的抗原性;免疫小鼠获得特异性多克隆抗体,有利于人偏肺病毒的深入研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘英华	天津市疾病预防控制中心病原生物检测所	45	188	7.0	11.0
2	苏旭	天津市疾病预防控制中心病原生物检测所	41	189	9.0	11.0
3	孔梅	天津市疾病预防控制中心病原生物检测所	12	71	3.0	8.0
4	李晓燕	天津市疾病预防控制中心病原生物检测所	13	40	3.0	6.0
5	郭丽茹	天津市疾病预防控制中心病原生物检测所	10	26	3.0	5.0
6	邹明	天津市疾病预防控制中心病原生物检测所	12	58	4.0	7.0