核桃举肢蛾性信息素结合蛋白2的分子克隆和免疫荧光定位

• 作者: 冯纪年 李文海 王敦 黄兴龙
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 核桃举肢蛾 性信息素结合蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫荧光定位
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 1054-1062
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2015.10.003

摘要

[目的]明确核桃举肢蛾Atrijuglans hetaohei Yang性信息素结合蛋白2(AhetPBP2)在核桃举肢蛾触角中的分布.[方法]本研究提取羽化后3-4d的核桃举肢蛾成虫触角总RNA并反转录合成eDNA,设计简并引物进行RT-PCR获得eDNA片段,然后利用RACE技术获得AhetPBP2全长eDNA序列.将去除信号肽序列的AhetPBP2进行原核表达,重组蛋白经镍柱纯化并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.制备的多克隆抗体作为一抗对核桃举肢蛾触角进行免疫组化分析.[结果]AhetPBP2基因cDNA序列全长923 bp,开放阅读框504 bp,共编码167个氨基酸,分子量为19.26 kD,等电点为5.47.1 mmol/L IPTG诱导10 h获得可溶性重组蛋白,Western blot结果表明重组蛋白诱导表达成功,ELISA检测显示抗体效价为1∶1 024 000.免疫荧光定位结果显示核桃举肢蛾成虫触角部分感器被AhetPBP2抗体标记.[结论]核桃举肢蛾成虫触角的部分感器中可能存在AhetPBP2,推测该部分感器具有感受性信息素的功能.