双重 TaqMan 实时荧光PCR 同时检测沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌方法的建立

• 作者: 曾爱民 李梦迪 窦丽芳
• 来源期刊: 食品安全导刊
• 关键词: 实时荧光PCR TaqMan 探针 方法标准化 沙门氏菌 单核细胞增生李斯特菌 iap基因 Fim-Y基因
• 年，卷（期）: 2015,（18）
• 所属期刊栏目: 科技 -- 科技文苑
• 页码范围: 137-143
• 页数: 7页
• 字数: 7162字
• 语种: 中文

摘要

以建立沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌双重TaqMan PCR方法为例，阐述TaqMan PCR方法建立的系统步骤和关键要素为目的，采用根据沙门氏菌FimY和单核细胞增生李斯特菌iap基因序列利用ABI primer express 3.0软件设计了物种特异性引物和TaqMan探针，采用标准曲线优化法对双重反应体系中引物和探针、Mg2+、dNTP浓度和Taq酶用量以及热循环条件等关键要素进行了优化，借助单双重PCR比较试验、多重PCR高低丰度模板抑制试验、灵敏度、特异性和重复性试验对建立的方法进行了验证进而得出了这样的结果：我们建立了涵盖设计要素、质控设置、体系优化、评价指标、验证试验共5个关键环节的双重TaqMan 实时荧光PCR方法建立模式。建立的方法灵敏度高，沙门氏菌100CFU/ml，单增750CFU/ml；特异性强，对8种阳性菌株和37种近缘及远缘关系的阴性菌株成功鉴别的方法。本研究可借鉴应用于所有以核酸为检测对象的TaqMan PCR方法的建立模式。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	窦丽芳		18	15	2.0	2.0
3	曾爱民		13	49	4.0	6.0
7	李梦迪		3	2	1.0	1.0