可诱导型CRISPRi系统的构建及其初步应用

• 作者: 姜勇 庞德剑 梅柱中 欧小利 陈新玉
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPRi 四环素调控表达系统 荧光素酶报告基因 KLHL21基因
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 128-132
• 页数: 5页
• 分类号: R334
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2015.02.026

摘要

[目的]构建可诱导型CRISPRi系统以特异性地抑制靶基因的表达.[方法]采用PCR技术将人ZNF10基因的KRAB结构域编码序列分别克隆至dCas9蛋白编码基因的5'端(KRAB-dCas9)与3'端(dCas9-KRAB).设计并构建靶向荧光素酶报告基因起始密码子附近序列的4种gRNA表达载体,其表达受到含有TetO调控元件的H1启动子调控.分析共表达dCas9蛋白和gRNA对共转染的荧光素酶报告基因表达水平的影响.在此基础上,设计并构建靶向人KLHL21基因转录起始位点附近区域的3种gRNA表达载体,将其与KRAB-dCas9融合表达载体分别共转染HEK293T细胞,24h后收集细胞并采用荧光实时定量PCR与蛋白质印迹技术分析KLHL21基因表达水平的变化.[结果]CRISPRi系统有效地抑制HEK293T细胞中荧光素酶报告基因与内源性的KLHL21基因的表达.共表达TetR抑制蛋白可阻断CRISPRi对荧光素酶报告基因表达的抑制作用,在细胞培养基中加入1μg/ml盐酸四环素可解除这种抑制作用.[结论]成功构建了可诱导型CRISPRi系统,可有效抑制真核细胞基因的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜勇		72	377	8.0	17.0
2	梅柱中		2	5	1.0	2.0
3	陈新玉		1	0	0.0	0.0
4	庞德剑		1	0	0.0	0.0
5	欧小利		1	0	0.0	0.0