小反刍兽疫RT-PCR的鉴定及N基因序列分析

• 作者: 周霞 张文娟 李小鹏 程松 罗满林 翟俊琼 翟少伦 陈华良
• 来源期刊: 亚洲兽医病例研究
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 P、N基因 逆转录–聚合酶联反应 同源性 序列分析
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 页码范围: 31-38
• 页数: 8页
• 分类号: S852

摘要

根据小反刍兽疫病毒(PPRV) P、N基因保守序列设计了两对引物,分别扩增部分P基因及N基因的全长阅读编码框(ORF),对疑似小反刍兽疫病毒的样品抽取RNA并以其为模板,在RT-PCR的体系中能扩增出预期大小分别为766 bp、1578 bp的目的片段,同时对退火温度,敏感性及特异性等RT-PCR反应条件进行了优化。在最佳反应条件下,该RT-PCR能检出最低850拷贝的PPRV基因组。对N全基因进行RT-PCR扩增并对PCR产物克隆于pMD-19T载体,转化感受态细胞DH5α后,对重组质粒测序,结果表明N基因全长大小与预期完全一致。并且这两个基因与新疆伊犁、北京所发生的小反刍兽疫病毒同源性高达100%,说明该病毒在中国南北方都有存在,其亚型为基因4型。