大肠埃希菌内参基因gapA克隆表达及抗体的制备与应用

• 作者: 周明旭 朱丛睿 朱国强
• 来源期刊: 扬州大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠埃希菌 3-磷酸甘油醛脱氢酶 gapA 内参蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61+2
• 语种: 中文

摘要

针对原核生物细菌作为内参蛋白至今鲜见报道,基于大肠埃希菌gapA基因编码的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)蛋白高度保守性,PCR扩增出人源大肠埃希菌益生菌Nissle1917的gapA基因并克隆入原核表达载体pET-28a(+),经IPTG诱导表达重组GAPDH蛋白.通过对重组蛋白的纯化并免疫BABL/c小鼠制备大肠埃希菌内参蛋白GAPDH多抗血清,结合SDS-PAGE和Western-blot试验.结果表明:GAPDH对大肠埃希菌及沙门氏菌属细菌代表株均具有良好的特异性识别反应.证明GAPDH蛋白可应用于原核生物细菌一类的内参蛋白,为深入研究肠杆菌,尤其是致病性大肠埃希菌和肠炎沙门氏菌的代谢通路以及合成生物学提供基础材料.