拟态弧菌的绿色荧光蛋白标记及其在感染草鱼体内的动态分布

• 作者: 侯立婷 李槿年 高会会 黄安宁
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼 拟态弧菌 增强型绿色荧光蛋白 动态分布
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 页码范围: 557-565
• 分类号: S917.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20141209594

摘要

为了示踪研究拟态弧菌感染草鱼的动态过程,将增强型绿色荧光蛋白编码基因EGFP克隆至质粒pBAD24,并转化到拟态弧菌04-14菌株构建荧光标记重组菌.重组菌经阿拉伯糖诱导后,能高效表达EGFP蛋白;荧光显微镜观察和流式细胞仪检测均发现重组菌能够发出明显的绿色荧光信号,且传至30代后质粒稳定率仍为100％;生物学特性检测结果显示,与野生株相比,重组菌的形态、生长特性和细胞黏附性均未发生明显改变.用标记重组菌浸泡感染草鱼,定点采集鳃、肠道、肌肉、头肾、脾脏和肝脏,借助荧光信号检测4d内细菌在不同组织脏器中的动态分布.结果发现感染4h后即可在肠道和鳃中检测到绿色荧光信号,标记菌检出量分别为3.60×108和2.36×106 CFU/g,直至10 h,其含量无明显变化,12 h后含菌量逐渐下降,但持续存在直至鱼死亡.标记菌在肌肉、头肾、脾脏和肝脏中呈现相似的动力学,感染24 h后才检测到荧光信号,24～ 85 h时间段含菌量呈现先增加后下降的变化,48 h达到峰值,检出量分别为9.58×104(肌肉)、8.75×104(头肾)、1.50×104(脾脏)和4.50×104 CFU/g(肝脏),但均低于肠道中的检出量,结果表明肠道是拟态弧菌黏附定植与繁殖的主要靶器官.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李槿年	安徽农业大学动物科技学院人兽共患病重点实验室	98	829	15.0	23.0
2	高会会	安徽农业大学动物科技学院人兽共患病重点实验室	1	10	1.0	1.0
3	侯立婷	安徽农业大学动物科技学院人兽共患病重点实验室	1	10	1.0	1.0
4	黄安宁	安徽农业大学动物科技学院人兽共患病重点实验室	2	17	2.0	2.0