瘤胃脂肪分解菌实时荧光定量PCR方法的构建

• 作者: 刘永斌 李长青 范文斌
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 瘤胃脂肪分解菌 实时荧光定量PCR 标准品质粒 标准曲线
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 154-157
• 页数: 4页
• 分类号: S826.8
• 字数: 3139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2015.01.025

摘要

为定量测定瘤胃脂肪分解菌，试验构建了脂肪分解菌实时荧光定量PCR的标准品及标准曲线。提取瘤胃微生物总DNA，以脂肪分解菌16 S rDNA特异性引物进行PCR扩增，回收PCR产物，与PMD19-T Vector连接并转化大肠杆菌。阳性重组质粒经PCR和测序鉴定后，将提取的质粒DNA进行梯度稀释并作为模板，利用荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果显示：PCR产物与目的基因的相似性大于99％，以不同稀释度的重组质粒为模板获得的荧光定量PCR扩增曲线差异明显，构建了相关系数接近1的标准曲线，且熔解曲线峰值单一。试验建立的实时荧光定量PCR方法可用于瘤胃脂肪分解菌的定量检测，为进一步研究该菌在反刍动物瘤胃发酵中的分子机理奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李长青		43	440	12.0	19.0
2	刘永斌		35	142	6.0	10.0
3	范文斌	呼和浩特职业学院生物化学工程学院	13	27	2.0	5.0