烟草非特异性脂质转移蛋白基因的克隆与表达分析

• 作者: 侯明生 李锋 杨军 林福呈 武明珠 王燃 罗朝鹏 金大伟 魏攀
• 来源期刊: 烟草科技
• 学科: 工学
• 关键词: 烟草 非特异性脂质转移蛋白基因 克隆 表达分析 生物信息学
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 烟草农学
• 页码范围: 12-20
• 页数: 9页
• 分类号: TS413
• 字数: 4862字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16135/j.issn1002-0861.20150103

摘要

为了阐明非特异性脂质转移蛋白基因NtLTP1.1在烟草抗病抗逆反应中的功能，用cDNA末端快速扩增技术（Rapid-amplification of cDNA ends，RACE）从普通烟草中克隆了该基因全长，并通过生物信息学方法分析了cDNA序列结构、蛋白理化性质、保守基序、三级结构以及系统进化关系；利用qRT-PCR检测了该基因在不同组织中的表达模式以及胁迫条件下的表达差异。结果表明：NtLTP1.1基因全长615 bp，编码蛋白含有129个氨基酸，为一种小分子碱性可溶性蛋白。蛋白序列N端含有信号肽，预测其可能定位于分泌途径中。Blast比对结果显示，烟草非特异性脂质转移蛋白与番茄nsLTP1序列相似性最高，含有8CM保守基序（8个半胱氨酸残基组成的保守基序）。蛋白三级结构预测表明，NtLTP1.1具有nsLTP典型的三级结构，包括4个α-螺旋，4对二硫键，1个可结合和容纳脂质分子的疏水腔。多重比对结果显示， NtLTP1.18CM结构域模式为C1-X9-C2-X13-C3C4-X19-C5XC6-X22-C7-X13-C8。系统进化分析结果表明，nsLTP进化形成5类，NtLTP1.1属于Type I。表达模式分析显示，NtLTP1.1基因主要在烟草叶片中表达，具有明显的组织表达特异性。在低温胁迫条件下表达受到抑制，在水杨酸诱导条件下表达上调。因此，推测NtLTP1.1基因可能在烟草防御反应中发挥作用。