臭氧对赤点石斑鱼神经坏死病毒 RNA破坏效果的评价方法的建立与应用

• 作者: 史成银 李晋 王胜强 粟子丹
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 赤点石斑鱼神经坏死病毒 RT-PCR 检测 臭氧 消毒
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 18-25
• 页数: 8页
• 分类号: S943
• 字数: 5580字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20150103

摘要

本研究依据赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus, RGNNV) RNA2的序列，在其3′端设计反转录引物，在5′端设计 PCR 扩增引物，构建了一种可以评价 RNA链相对完整性的 RT-PCR 方法，命名为 LR RT-PCR(Left reverse transcript Right amplify RT-PCR)，并对该方法的引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs 浓度、退火温度4个重要参数进行了优化。结果显示，优化后的 LR RT-PCR 反应体系为：引物浓度0.2μmol/L、Mg2+浓度4 mmol/L、dNTPs 浓度0.5 nmol、退火温度60℃。本研究建立的 LR RT-PCR 方法灵敏度高，可以检出1 pg 的 RGNNV RNA2标准品；该方法特异性强，与 RSIV 等鱼类常见病毒、鳗弧菌等常见水产病原菌以及石斑鱼 RNA 均不产生交叉反应。应用建立的 LR RT-PCR 方法对臭氧破坏 RGNNV RNA2的效果进行评价，发现当臭氧浓度由0.3 mg/L 依次增加为0.5、1.0、2.0 mg/L 时，LR RT-PCR 的扩增产物逐渐减少，直至消失。结果表明，建立的 LR RT-PCR 方法可以快速、准确地评价臭氧对 RGNNV RNA2的破坏效果，适用于养殖场评估臭氧对 RGNNV 的消毒效果，并对 RGNNV 进行检测和监控。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史成银	农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所	10	52	4.0	7.0
2	李晋	农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所	3	3	1.0	1.0
6	王胜强	农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所	2	1	1.0	1.0
10	粟子丹	农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所	3	2	1.0	1.0