B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用初步研究

• 作者: 余敏君 唐双阳 张璐思 李开铭 胡四海 谢梅花 邓苏宏
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B群脑膜炎奈瑟菌 B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315 核酸疫苗 免疫活性 免疫保护
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 生物治疗
• 页码范围: 1648-1653,1658
• 页数: 7页
• 分类号: R392.12
• 字数: 5232字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2015.12.014

摘要

目的:构建B群脑膜炎奈瑟菌pcDNA3.1 (+)/NMB0315 真核表达重组质粒,检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用,初步探讨NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果,为研制一种新的预防B群流脑的核酸疫苗提供实验依据. 方法:以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板设计引物,PCR扩增NMB0315基因,克隆至pcDNA3.1 (+)真核表达载体中,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切及测序鉴定重组质粒.构建成功的pcDNA3.1(+)/NMB0315重组质粒转染COS-7细胞和RAW264.7细胞,免疫细胞化学染色法和Western blot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达. 大量提取重组质粒,肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内抗NMB0315的特异性体液免疫和细胞免疫水平;测定免疫血清体外杀菌滴度,观察核酸疫苗对实验小鼠的免疫保护效果. 结果:构建的核酸疫苗pcDNA3.1 (+)/NMB0315能够在真核细胞中有效转录和表达;免疫小鼠后能诱导产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答. 在疫苗免疫后的2、4、6周,pcDNA3.1(+)/NMB0315组和pcDNA3.1(+)/NMB0315+CpG组血清总IgG及IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3亚类抗体水平呈递增趋势,均明显高于PBS、pcDNA3.1(+)、CpG对照组(P<0.001);小鼠血清IgG2a/IgG1比值均小于1;生殖道灌洗液中特异性sIgA水平均明显高于PBS、pcDNA3.1(+)、CpG对照组(P<0.01). 免疫第6周,脾淋巴细胞刺激指数(SI)均明显高于对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05). pcDNA3.1(+)/NMB0315+CpG、pcDNA3.1(+)/NMB0315 疫苗组免疫血清补体介导的体外杀菌效价分别为1:128和1:64;在致死量B群脑膜炎奈瑟菌MC58攻击后72 h存活率分别为70%和65%,对照组[PBS,pcDNA3.1(+),CpG]72 h存活率为0. 结论:NMB0315核酸疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫(包括黏膜免疫)和细胞免疫应答;免疫血清补体介导的体外杀菌活性较高;NMB0315核酸疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌小鼠具有较强的免疫保护作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡四海	南华大学病原生物学研究所	53	207	8.0	11.0
2	余敏君	南华大学病原生物学研究所	104	491	11.0	17.0
3	唐双阳	南华大学病原生物学研究所	71	348	11.0	15.0
4	李开铭	南华大学病原生物学研究所	4	7	2.0	2.0
5	谢梅花	南华大学病原生物学研究所	4	6	2.0	2.0
6	张璐思	南华大学病原生物学研究所	4	8	2.0	2.0
7	邓苏宏	南华大学病原生物学研究所	4	15	2.0	3.0