仔猪外周血中内参基因的筛选及细胞因子和受体的表达水平

• 作者: 张印 林松 武英 王彦平 王怀中 王继英 郭建凤
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 细胞因子 模式识别受体 基因表达 大蒲莲 长白 仔猪
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 1437-1444
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.07.18

摘要

【目的】中国地方猪种在抗病性和免疫力方面优于国外猪种，但是对中外猪种抗病力差异的遗传基础和免疫机理却了解甚少。有推测不同品种猪对疾病的抵抗力不同可能在细胞因子和受体的表达水平上有所反映。本研究以抗病力强的大蒲莲和抗病力相对较弱的长白猪的断奶仔猪为研究对象，对6个具有重要功能的细胞因子（促炎症细胞因子（IL8和 TNFα），抗炎症细胞因子（IL10），干扰素调节因子（IRF3）和干扰素（IFNA 和 IFNG））和1个最具代表性的模式识别受体（TLR4）基因在大蒲莲和长白仔猪群体外周血液中的基因表达量进行检测，并对各基因进行品种和母猪效应分析，为了解中外不同猪种的免疫水平奠定基础。【方法】采集大蒲莲（104头）和长白（171头）35日龄仔猪的外周血，提取总 RNA，逆转录为 cDNA 后，利用荧光定量 PCR 法，首先对6个常用的候选内参基因（ACTB、GAPDH、B2M、TBP、RPL4和 PPIA）利用 geNorm 软件进行稳定性评价分析，筛选仔猪外周血 RNA 基因定量分析中稳定表达的内参基因，然后利用该内参基因进行校正，对上述细胞因子和模式识别受体基因在大蒲莲和长白仔猪群体外周血中的表达量进行定量，并利用最小二乘法对细胞因子和受体在大蒲莲和长白仔猪群体中的表达量进行品种和母猪效应分析。【结果】研究结果归纳为4个方面：1.外周血样品中内参基因稳定性值 M 从大到小依次为：ACTB（0.595）＞GAPDH（0.571）＞PPIA（0.469）＞RPL4（0.466）＞TBP（0.461）＞B2M（0.440），选择表达稳定性最高的基因 B2M 作为内参基因对细胞因子和受体基因的表达量进行校正。2.检测的6个细胞因子的基因表达量存在很大的差异，各细胞因子基因表达量ΔCt 最大值和最小值之间差值分别为9.23—14.25和5.83—8.73；受体 TLR4的ΔCt 值的最大和最小值之间相差相对较小，大蒲莲和长白仔猪分别为5.03和3.82。3.大蒲莲和长白两品种间相比较，细胞因子在长白猪群体中的表达量平均值均高于大蒲莲群体，而受体 TLR4的基因表达量在长白猪群体中的表达量低于大蒲莲群体；而且，大蒲莲群体内个体间细胞因子和受体表达量变异系数（平均31.43%）要大于长白群体（平均19.10%），这与大蒲莲选育程度低，群体内个体间的差异程度要大相一致。4.品种效应分析表明除 IL10外，其他6个目的基因的ΔCt 值品种间差异达显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）水平。母猪效应分析表明母猪对各细胞因子和受体的影响均达到了极显著水平（P＜0.01）。【结论】成功筛选了外周血基因表达分析中稳定表达的内参基因（B2M），对常规饲养管理下大蒲莲和长白仔猪外周血中的主要细胞因子和受体基因的表达进行群体水平分析。本研究结果为了解中外不同猪种的种质特性和抗病品种的选育提供了基础数据。