南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化

• 作者: 唐天乐 张俊清 潘坤 田建平 高炳淼 魏娜
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 益智 AFLP-PCR 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 251-255
• 页数: 5页
• 分类号: Q781
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2015.03.052

摘要

[目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性.[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合益智AFLP分析的引物组合进行筛选.[结果]实验结果表明最佳酶切反应体系:模板DNA 0.6μg,酶量20 U,酶切时间2h;最佳AFLP-PCR选择性扩增反应体系(总体积为25 μL):10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5 μL,dNTPs 2 μL,Mg2+(25mmol/L) 1.5 μL,引物(10 pmol/μL)各2.0μL,Taq酶(5 U/ml)0.5μL,模板稀释25倍2μL.利用建立的最佳扩增体系从64对引物中筛选获得8对选择性引物适合益智AFLP分析.[结论]建立了稳定的AFLP-PCR体系,为研究益智遗传多样性的AFLP分析奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田建平		30	116	7.0	9.0
2	张俊清		143	799	13.0	24.0
3	高炳淼		27	22	3.0	3.0
4	魏娜		46	121	6.0	9.0
5	潘坤		7	1	1.0	1.0
6	唐天乐		17	29	4.0	5.0