长链非编码RNA0610009 E02 Rik／Notch1腺病毒载体构建及其在原代肝细胞中的表达

• 作者: 乔建林 夏园 姚海娜 徐开林 曾令宇 李小莉 杨娜 秘红岭 褚培培 陈朝 陈翀
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 长链非编码RNA 重组腺病毒 肝细胞
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 192-196
• 页数: 5页
• 分类号: R342.3
• 字数: 3407字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2015.04.002

摘要

目的：构建长链非编码RNA?0610009 E02 Rik （长链非编码RNA?0610009 E02 Rik，简称Rik）重组腺病毒载体，制备一定滴度含Rik基因的重组腺病毒，为后续研究Rik的生物学功能提供实验工具。方法①应用分子克隆技术以Rik的cDNA为模板， PCR扩增，酶切，将酶切后的目的基因连接到腺病毒穿梭质粒GV315上，产生0610009 E02 Rik腺病毒表达载体，连接好的产物转化感受态大肠埃希菌进行克隆，对阳性克隆进行酶切鉴定并测序；②重组腺病毒穿梭质粒和辅助包装质粒pBHG在人胚胎肾293细胞中包装、扩增、纯化并测定病毒滴度；③将构建好的腺病毒感染原代肝细胞， Real?time PCR检测原代肝细胞内Rik的相对表达水平。结果①成功构建Rik重组腺病毒穿梭载体；②重组病毒经扩增、纯化，最终滴度测定约为2×1010 PFU／ml；③ Real?time PCR检测过表达组肝细胞内Rik的表达量约为对照组的2440＋0?36倍（P＜0?05），差异有统计学意义。结论构建含Rik基因的腺病毒载体，在小鼠原代肝细胞内成功实现了Rik基因的表达上调，为后续开展有关Rik生物学功能及分子机制研究奠定基础。