基于种特异性COI标记的新入侵种甘蓝粉虱快速鉴定技术

• 作者: 万方浩 张桂芬 张金良 杨锦 郭荣 陈苗苗
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甘蓝粉虱 隐种 种特异性SS-COI引物 快速鉴定 分子检测
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 进化与系统学
• 页码范围: 579-586
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2015.05.013

摘要

[目的]针对粉虱类害虫种类多、体型微小、形态相似、难以准确快速识别的问题,以新入侵我国大陆的甘蓝粉虱Aleyrodes proletella(L.)为靶标,以田间常见的其他10种/隐种粉虱为参照,采用基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ (mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunit I,mtDNA COI)基因的种特异性(species-specific COI,SS-COI) PCR方法,研究其快速分子检测技术.[方法]利用mtDNA COI基因通用型引物LCO-1490/HCO-2198获得甘蓝粉虱及其他常见粉虱的COI序列,根据测序结果设计种特异性SS-COI引物1对(APZYJF/APZYJR),其扩增片段大小为384 bp,同时对该对引物的种特异性及灵敏性进行检测.[结果]种特异性检验结果显示,该对引物仅对甘蓝粉虱的mtDNA COI基因具有扩增效果,对我国常见的其他种类的粉虱包括温室粉虱Trialeurodes vaporariorum(Westwood)、柑橘粉虱Dialeurodes citri(Ashmead)、螺旋粉虱Aleurodicus disperses (Russell)、双钩巢粉虱Paraleyrodes pseudonaranjae Martin、非洲伯粉虱Bemisia afer(Priesner et Hosny)以及烟粉虱B.tabaci (Gennadius)5个隐种(MED,Asia Ⅰ,Asia Ⅱ 1,Asia Ⅱ 3和China 1)等不具有交叉反应扩增能力.灵敏性检验结果显示,该对引物不仅对不同性别的成虫具有良好的扩增效能,对2-4龄若虫甚至单粒卵或单头初孵若虫亦具有同样的扩增能力,其最低检测阈值为14.00 ±0.37 pg/μL(相当于1/25 600头雌性成虫).[结论]该技术体系完全可用于甘蓝粉虱的快速准确识别及检测监测,对有效阻截其进一步扩张蔓延意义重大.